Produção de anti‑soros policlonais a partir de proteínas capsidiais recombinantes de Grapevine leafroll‑associated virus 2 e Grapevine virus B
DOI:
https://doi.org/10.1590/S1678-3921.pab2008.v43.1039Palavras-chave:
<i>Vitis</i>, GLRaV‑2, GVB, ELISA indireto, proteína recombinante, Western blotResumo
O objetivo deste trabalho foi produzir e caracterizar anti-soros específicos contra isolados brasileiros do Vírus do enrolamento-da-folha da videira 2 (GLRaV-2) e do Vírus B da videira (GVB), desenvolvidos a partir das proteínas capsidiais expressas em Escherichia coli, e testar seu possível uso para a detecção destes dois vírus em videiras infectadas. Os genes da proteína capsidial (CP) foram amplificados via RT-PCR, clonados e seqüenciados. Foram, subseqüentemente, subclonados, e os plasmídeos recombinantes foram empregados na transformação das células de E. coli e na expressão das proteínas capsidiais. As proteínas capsidiais recombinantes foram purificadas, e suas identidades foram confirmadas em SDS-PAGE e "Western blot" e utilizadas para imunizar coelhos. Os anti-soros produzidos contra essas proteínas foram capazes de reconhecer as proteínas recombinantes correspondentes em "Western blot", de detectar GLRaV-2 e GVB em tecidos infectados de videiras pelo ELISA indireto, e de discriminar videiras sadias e infectadas, com absorbâncias (A405) de 0,08/1,15 e 0,12/1,30, respectivamente. A expressão dos genes CP pode produzir grandes quantidades de proteínas virais, com elevada antigenicidade, e os anti-soros de GLRaV-2 e GVB obtidos neste trabalho possibilitam a diagnose confiável desses vírus.Downloads
Publicado
2008-10-31
Como Citar
Radaelli, P., Fajardo, T. V. M., Nickel, O., Eiras, M., & Pio-Ribeiro, G. (2008). Produção de anti‑soros policlonais a partir de proteínas capsidiais recombinantes de <i>Grapevine leafroll‑associated virus</i> 2 e <i>Grapevine virus B</i>. Pesquisa Agropecuária Brasileira, 43(10), 1405–1411. https://doi.org/10.1590/S1678-3921.pab2008.v43.1039
Edição
Seção
VIROLOGIA