Produção de anti‑soros policlonais a partir de proteínas capsidiais recombinantes de Grapevine leafroll‑associated virus 2 e Grapevine virus B

Autores

  • Paula Radaelli Universidade Federal Rural de Pernambuco
  • Thor Vinícius Martins Fajardo Embrapa Uva e Vinho
  • Osmar Nickel Embrapa Uva e Vinho
  • Marcelo Eiras Instituto Biológico
  • Gilvan Pio-Ribeiro Universidade Federal Rural de Pernambuco

DOI:

https://doi.org/10.1590/S1678-3921.pab2008.v43.1039

Palavras-chave:

<i>Vitis</i>, GLRaV‑2, GVB, ELISA indireto, proteína recombinante, Western blot

Resumo

O objetivo deste trabalho foi produzir e caracterizar anti-soros específicos contra isolados brasileiros do Vírus do enrolamento-da-folha da videira 2 (GLRaV-2) e do Vírus B da videira (GVB), desenvolvidos a partir das proteínas capsidiais expressas em Escherichia coli, e testar seu possível uso para a detecção destes dois vírus em videiras infectadas. Os genes da proteína capsidial (CP) foram amplificados via RT-PCR, clonados e seqüenciados. Foram, subseqüentemente, subclonados, e os plasmídeos recombinantes foram empregados na transformação das células de E. coli e na expressão das proteínas capsidiais. As proteínas capsidiais recombinantes foram purificadas, e suas identidades foram confirmadas em SDS-PAGE e "Western blot" e utilizadas para imunizar coelhos. Os anti-soros produzidos contra essas proteínas foram capazes de reconhecer as proteínas recombinantes correspondentes em "Western blot", de detectar GLRaV-2 e GVB em tecidos infectados de videiras pelo ELISA indireto, e de discriminar videiras sadias e infectadas, com absorbâncias (A405) de 0,08/1,15 e 0,12/1,30, respectivamente. A expressão dos genes CP pode produzir grandes quantidades de proteínas virais, com elevada antigenicidade, e os anti-soros de GLRaV-2 e GVB obtidos neste trabalho possibilitam a diagnose confiável desses vírus.

Biografia do Autor

Thor Vinícius Martins Fajardo, Embrapa Uva e Vinho

Thor Vinícius Martins Fajardo é engenheiro agrônomo, formado pela Universidade Federal de Viçosa (UFV), Viçosa-MG, em 1991; possui mestrado em Fitopatologia (área de concentração Virologia Vegetal) pela mesma universidade em 1993; doutorado em Fitopatologia (Virologia Vegetal) pela Universidade de Brasília (UnB), Brasília-DF, em 1998 e pós-doutorado em Virologia Molecular pelo Conselho Superior de Investigações Científicas (IBMCP-CSIC), Valência, Espanha, em 2006. Já publicou cerca de 30 artigos científicos em revistas técnico-científicas e apresentou 80 trabalhos de pesquisa em congressos científicos nacionais e internacionais. Desde 1997 é pesquisador da Embrapa Uva e Vinho (Bento Gonçalves-RS) onde desenvolve pesquisas relacionadas a detecção, caracterização e controle de viroses que infectam a videira e as fruteiras temperadas (pessegueiro, macieira, pereira, morangueiro, dentre outras).

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Publicado

2008-10-31

Como Citar

Radaelli, P., Fajardo, T. V. M., Nickel, O., Eiras, M., & Pio-Ribeiro, G. (2008). Produção de anti‑soros policlonais a partir de proteínas capsidiais recombinantes de <i>Grapevine leafroll‑associated virus</i> 2 e <i>Grapevine virus B</i>. Pesquisa Agropecuária Brasileira, 43(10), 1405–1411. https://doi.org/10.1590/S1678-3921.pab2008.v43.1039

Edição

Seção

VIROLOGIA